WEKO3
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TtGuaBの結晶化およびStPurCの構造精密化
https://uec.repo.nii.ac.jp/records/2176
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名前 / ファイル | ライセンス | アクション |
---|---|---|
1133014.pdf (3.5 MB)
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|
Item type | 学位論文 / Thesis or Dissertation(1) | |||||
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公開日 | 2013-03-25 | |||||
タイトル | ||||||
言語 | ja | |||||
タイトル | TtGuaBの結晶化およびStPurCの構造精密化 | |||||
言語 | ||||||
言語 | jpn | |||||
資源タイプ | ||||||
資源タイプ識別子 | http://purl.org/coar/resource_type/c_46ec | |||||
資源タイプ | thesis | |||||
著者 |
梅林, 亮輔
× 梅林, 亮輔 |
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抄録 | ||||||
内容記述タイプ | Abstract | |||||
内容記述 | 1.研究の目的と概要プリンヌクレオチド生合成系は,PRPPを出発物質としてIMPを経て,AMPやGMPを合成する全部で14の反応から構成されている。13番目の反応では,IMPデヒドロゲナーゼ(GuaB)が酵素として働き,NAD+でIMPを酸化してXMPに変換する。また,7番目の反応では,SAICARシンテターゼ(PurC)が酵素として働き,ATPの加水分解と共役してアスパラギン酸とCAIRを縮合してSAICARを合成する。本研究では,Thermus thermophilus HB8由来GuaB(TtGuaB)については,立体構造を決定し,その生化学的な特性における新たな知見を得ることを目的とした。Sulfolobus tokodaii strain7由来PurC (StPurC)については,立体構造解析を行い,他生物種由来PurCとの構造比較および活性部位の比較を行うことで,共通点や相違点などを発見することを目的とした。2.方法・結果・TtGuaB発現ベクターpET-3aを宿主菌Rosetta-gami株に形質転換して大量発現を行い,HPLCにて精製した。精製後,様々な条件下で酵素活性を測定し,さらにハンギングドロップ蒸気拡散法にてタンパク質の結晶化を行った。その結果,結晶は得られたものの,析出までに約6~12ヶ月もかかってしまった。そこで,より高濃度かつ高純度なタンパク質を得るために再精製を試みた。・StPurC理化学研究所播磨研究所の倉光先生の研究グループとの共同研究で,大量発現,精製,結晶化,X線回折,回折データの収集・処理を行って頂いた。現在,モデルの修正および構造精密化を行っており,R値24.9%,freeR値30.6%のモデルが得られている。また,現時点でのStPurCの構造と既に立体構造が決定されている他生物種由来PurCの構造を比較した。その結果,StPurCを含むほとんどの原核生物由来のPurCは,二量体構造を形成していることが分かった。さらに,基質結合部位の特定や単量体構造との比較も行った。 | |||||
学位授与機関 | ||||||
学位授与機関名 | 電気通信大学 | |||||
学位授与年度 | ||||||
内容記述タイプ | Other | |||||
内容記述 | 2012 | |||||
学位授与年月日 | ||||||
学位授与年月日 | 2013-03-25 | |||||
専攻 | ||||||
先進理工学専攻 |